PCR是利用一段DNA為模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物共同參與下,將該段DNA擴增至足夠數量,以便進(jìn)行結構和功能分析。PCR醫學(xué)檢測方法在臨床上快速診斷細菌性傳染病等方面具有極為重要的意義。
PCR原理用于擴增位于兩段已知序列之間的DNA片段,類(lèi)似于天然DNA的復制過(guò)程。以擬擴增的DNA分子為模板,以一對分別與模板5’末端和3’末端互補的寡核苷酸片段為引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留復制的機制沿著(zhù)模板鏈延伸直至完成新的DNA合成,重復這一過(guò)程,即可使目的DNA片段得到擴增。
PCR醫學(xué)檢測先根據試劑盒說(shuō)明書(shū)樣本要求,進(jìn)行標本采集,常規的樣本類(lèi)型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。獲得患者樣本后需盡快進(jìn)行檢測,如無(wú)法立即檢測需要轉運的樣本,應按照說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行低溫封存,并送到專(zhuān)門(mén)的檢測機構進(jìn)行檢測。檢測機構收到樣本后會(huì )對樣本進(jìn)行核酸提取。核酸提取試劑應使用批準的、產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中的核酸提取試劑盒,病毒RNA先需要轉轉錄為cDNA,再進(jìn)行擴張檢測。PCR檢測應使用批準產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中的熒光定量PCR儀,通過(guò)熒光定量PCR所得到的樣本CT值的大小,可以判斷患者樣本中是否含有的病毒。